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          在室溫中對ecl超敏發光液進行實驗操作要注意些什么
          發布時間:2019-04-28   點擊次數:944次
             在室溫中對ecl超敏發光液進行實驗操作要注意些什么
            ecl超敏發光液的操作步驟
            方法/步驟1:
            常規電泳、轉膜、HRP標記抗體或核酸探針孵育、洗膜。以下操作在室溫進行。
            方法/步驟2:
            新鮮配制發光工作液。將BufferA和BufferB按1:1比率混合,制成發光工作液(每25px2膜需要0.125ml發光工作液)。轉移到清潔的塑料小盒中。
            方法/步驟3:
            用鑷子將漂洗過的膜取出,將膜的下緣與濾紙輕輕接觸以除去膜上多余的洗液,但勿使膜完全干燥。將膜轉移至有發光工作液的塑料小盒中,使其完全浸泡,輕輕搖晃,室溫孵育幾十秒到1分鐘。
            方法/步驟4:
            用鑷子將膜夾起5-10秒,并將膜的下緣與濾紙輕輕接觸以除去膜上多余的發光液,迅速將膜完全包裹于潔凈保鮮膜內,去除氣泡和褶皺,蛋白面朝上固定于X片暗盒內。
            方法/步驟5:
            在黑暗中一次重疊放入3張X光膠片,30分鐘或更長時間后全部取出顯影。
            方法/步驟6:
            對同一張膜進行多次蛋白雜交:用PBST或TBST洗滌掉發光液(10min×3次),然后從開始一抗雜交即可。
            注意事項
            優化一抗和二抗的比例
            選擇高質量的膜
            ecl超敏發光液的注意事項
            1.為獲得*實驗結果,請務必優化實驗條件,包括檢測樣品的用量、一抗、二抗稀釋度、雜交膜及封閉試劑的選擇,并且發光液請現用現配。
            2.建議在封閉緩沖液及所有抗體稀釋液中加入高質量的吐溫-20(終濃度為0.05%),以減少非特異性結合。
            3.由于疊氮鈉是HRP抑制劑,在緩沖液中應避免使用疊氮鈉作為防腐劑。
            4.免疫印跡實驗進行全過程中,請確保印跡膜始終處于濕潤狀態,避免干燥。
            5.在與膜發生接觸過程中請佩戴手套或者使用潔凈鑷子,避免蛋白污染。
            6.實驗過程中,請使用潔凈器材。保證非金屬設備沒有明顯劃痕,金屬設備表面無銹。銹可能導致膜上帶有污點或者高背景。
            以上便是今天關于在室溫中對ecl超敏發光液進行實驗操作要注意些什么的全部分享了,希望對大家今后使用本設備能有幫助。
           
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